杨成焕   叶媛  杨姚  李阔  姚娅婷   王静静   张田      王敏康

【摘要】目的: 探讨红芸豆植物凝集素(PHA)在终止小鼠中晚期妊娠时对孕鼠相关神经内分泌激素水平的影响。 方法: 将妊娠14 d的孕鼠随机分为PHA组和溶剂对照(PBS)组, 每组各40只。采用非手术法经阴道向每只孕鼠子宫注射 5 mg 的红芸豆 PHA 或等量的 PBS, 并于注射后 2 h、5 h、 8 h及发生流产时采血, 取子宫胎盘(每个时间点每组处死10只动物), 采用电化学发光法对孕鼠血清中的孕酮(P)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、催乳素(PRL)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)进行检测, 比较妊娠结局; 用派诺宁-甲基绿染色法观察子宫、胎盘石蜡切片。结果: 注射PHA组孕鼠血清中 E2、FSH、LH 和 T 水平与注射 PBS 组无统计学差异; 而 P 和 PRL 水平在注射红芸豆 PHA 后 2 h时明显高于PBS组, 流产时明显低于PBS组; PHA组胎盘出现明显细胞凋亡。结论: 红芸豆PHA终止小鼠中晚期妊娠并不改变孕鼠体内的 E2、FSH、LH 和 T 水平, 但对 P 和 PRL 有较大影响, 提示红芸豆PHA通过作用于子宫局部而导致流产, 不影响中枢神经内分泌系统。

关键词: 红芸豆; 植物凝集素(PHA); 小鼠; 中晚期妊娠; 性激素; 催乳素(PRL); 孕酮(P)

中图分类号: R714.21          文献标识码: A             文章编号: 0253-357X(2015)07-0440-06

凝集素最早是在植物种子中被发现的, 因具有使红细胞凝集的作用, 被称为植物血凝素 (phytohaemagglutinin, PHA)^[1]。实验证明^[2-9], PHA在微生物防御、抗肿瘤、抗病毒及避孕等方面具有重要作用。随着对其理化性质、生物活性及其作用机制方面的深入研究, 越来越多的证据显示出其将会在生物、医学、畜牧业中有着广泛的应用价值。以往的研究已表明包括芸豆 PHA 在内的植物_{凝集素具抑制受精}[8,10,11]_、避孕[12,13]_、抗着床[8,14]和终止妊娠的作用^[7,8], 同时具有良好的抗人类免疫缺陷病毒(HIV)性能^[9,15,16], 是杀精子剂或杀微生物剂的选择^[17,18]。作为避孕或终止妊娠者用药, 芸豆PHA的作用机理如何, 是否通过影响神经内分泌或激素水平变化, 如何发挥作用等还未见报道。 作为一种蛋白类大分子物质, 芸豆PHA有许多不同于甾体类激素的特点。 对其作用机理进行深入研究和探索有助于开发新型多效的避孕和抗病毒包括 HIV 在内的新型计划生育用品。 本研究通过子宫给药的方式观察红芸豆 PHA 在终止小鼠妊娠过程中对生殖内分泌激素的影响, 探讨红芸豆 PHA 在终止小鼠中晚期妊娠时的生殖内分泌激素变化规律和机理, 为基础理论和实际应用提供实验依据。

1     材料与方法

1.1  实验动物

80只SPF级昆明白小鼠, 体质量为25~28 g, 购于昆明医科大学实验动物中心。在室温21~25 ℃下饲养, 12 h光照, 12 h黑暗, 自由摄食与饮水。

1.2  试剂及仪器

红芸豆植物凝集素(红芸豆 PHA 或 Red kidney bean lectin, RKBL)由本实验室从红芸豆(Phaseolus vulgaris Linnaeus)中按照相关专利ZL200910094233.1内容进行提取, 采用双缩脲法测定蛋白质浓度, 并采用旋转蒸发仪浓缩至所需浓度。用于注射的 PHA 含 0.8%NaCl, 临用时用 PBS 配制成所需的浓度。

电化学发光检测试剂: 注射用血促性素(PMSG)和人绒毛膜促性激素(hCG)购自杭州动物药品厂, 生产批号分别为 140102 和 140214; 贝克曼 DXI800配套试剂盒由贝克曼库尔特(Beckman Coulter)有限公司提供, 包括黄体生成素(LH, 试剂批号为329871)、卵泡刺激素(FSH, 试剂批号为332576)、雌二醇(E2, 试剂批号为 335286) 、睾酮(T, 试剂批号为 334146)、泌乳素(PRL, 试剂批号为332904)、孕酮(PRG, 试剂批号为335287)。其余试剂均为国产分析纯试剂, 购自天津市化学试剂三厂, 用于配制 PBS 等溶液。TGL-168高速台式离心机购自上海安亭科学仪器; 贝克曼DXI800 化学发光仪, 仪器序列号603021,为贝克曼库尔特(Beckman Coulter)有限公司产品。

1.3  实验方法

1.3.1 孕鼠的准备    对雌鼠进行超促排卵处理: 下午 6∶ 00皮下注射 PMSG, 5 IU/只, 48 h后腹腔注射 hCG, 5 IU/ 只, 并与雄鼠按雌∶雄 2∶1 合笼,次日上午 8∶00 查阴栓, 见栓者为妊娠第 1 日。

1.3.2 分组及给药方法 于妊娠第14 日将孕鼠随机分为 PHA 组和 PBS 组, 每组 40 只, 其中每个时间处理亚组各 10 只。PHA 组和 PBS 组均于妊娠第 14 日用非手术法行单侧子宫单次注射, 即用尖端磨钝的16 号针头从阴道开口端注入孕鼠的单侧子宫腔内, PHA组每只注射浓度为100 g/L的红芸豆PHA 0.05 ml,即5 mg/只, 该剂量根据以往的实验结果^[8]及红芸豆 PHA 的预实验结果拟定。我们的预实验结果表明非手术法经阴道进行单侧子宫单次注射 5 mg 红芸豆 PHA 可导致小鼠流产, 且流产率达 100%。PBS 组注射等量PBS, 即0.05 ml/只。

1.3.3 取材          分别于注射后2 h、5 h、8 h和24 h或见到流产现象时(即孕鼠阴道出现流血现象)对孕鼠进行眼眶采血, 400 × g 离心分离血清。-20 ℃冻存备用。注射后 2 h、5 h、8 h 和 24 h 每组分别处死动物10只, 取子宫剖开获得胎盘。在流产时或给药后24 h分离出的或子宫内的胎盘, 用中性甲醛进行固定。石蜡包埋切片(20 mm), 采用吡罗红 - 甲基绿染色并进行形态学观察分析。

1.3.4 检测与分析 由昆明金域检验有限公司采用贝克曼 D X I 8 0 0 化学发光仪对血清 P 、E2、T 、 P R L 、L H 、F S H 进行电化学发光法检测。

1.4  统计学处理

数据以均数±标准差 ^-±s 表示, 运用SPSS11.5(x     )软件对实验测定数据进行独立样本t检验, P<0.05为差异有统计学意义。

2      结果

2.1  妊娠结局

PHA 组在注射红芸豆 PHA 后孕鼠立即出现腹部收缩以及轻微毛发蓬松现象, 在注射PHA 7.5~9.5 h 时孕鼠出现流产现象; 注射5 h时解剖孕鼠可见子宫系膜及胎盘出现明显充血现象(图1); 注射 PHA后 8 h孕鼠胎盘厚度较PBS组明显变薄, 胎鼠与胎盘脱落(少数胎鼠与胎盘已从阴道娩出), 胎盘易与子宫分离。 PBS组孕鼠无明显异常表现, 解剖各组孕鼠子宫及胚胎均正常。观察胎盘组织切片显示, PHA 组细胞颜色偏红, 出现明显的细胞凋亡现象(图2)。

2.2  激素水平

PHA 组孕鼠血清中 E2、FSH、LH 以及 T 与 PBS 组无统计学差异(P>0.05)(表 1 和表 2)。 PHA 组孕鼠血清中P的水平与PBS组相比呈先升后降的

                                     

趋势, 在注射 PHA 后 2 h 时 P 在血清中的含量达到最高值, 几乎是 PBS 组的7 倍; 注射 PHA 5 h后血清中 P的水平已明显下降, 但依然高于PBS组, 但在注射 PHA 8 h 后血清中 P 的水平已明显低于 PBS组; 而当出现流产现象时, 血清中的P含量已达到最低值(表 3)。PHA 组孕鼠 PRL 血清中的含量变化趋势与 P 类似, 在注射 PHA 后 2 h 时 PRL 高于 PBS 组,但在注射 PHA 后 5 h 时已明显低于 PBS 组(表 4)。

表 1			-
	孕鼠血清中E2 含量变化情况(ng/L)(x±s)
Table 1 Changes of E 2  in pregnant mouse serum
处理后时间		PBS组	组 PHA
Duration after
		PBS group	PHA group	P
treatment
n*		7	6
2 h		32.86±6.93	44.67±11.26	0.376
5 h		37.17±8.04	46.83±10.36	0.478
8 h		39.88±4.61	33.57±4.77	0.360
流产 Abortion		39.88±4.61	33.40±2.42	0.320

*: 10只见栓小鼠中解剖时确认妊娠的小鼠数 No. of

pregnant mice confirmed by anatomy in ten mice with vaginal suppository

表 2	注射后 5  h 孕鼠血清中 FSH、 LH 及 T 的含量
Table 2 Changes of FSH, LH and T in pregnant mouse
	serum at 5 h after administration
激素		组 PBS	组 PHA	P
Hormone		PBS group
			PHA group
	n	10	10
FSH (IU/L)		0.072±0.127	0.079±0.179	0.754
LH (IU/L)		0.388±0.284	0.534±0.223	0.691
T (mg/L)		8.976±0.875	10.038±0.688	0.350

表 3			-
	孕鼠血清中P含量变化情况表( mg/L)(x±s)
Table 3 Changes of P in pregnant mouse serum
处理后时间		PBS组	组 PHA
Duration after
		PBS group	PHA group	P
treatment
	n	6	6
2 h		25.205 ±4.733	171.892±23.821	0.000
5 h		29.610 ±4.909	40.314±12.466	0.492
8 h		35.282±4.777	17.583±4.180	0.032
流产 Abortion		35.282±4.777	12.872±4.172	0.007

		-
表 4 孕鼠血清中PR

L含量变化情况表(mg/L)(x±s)
Table 4 Changes of PRL in pregnant mouse serum
处理后时间	PBS组	组PHA
Duration after
	PBS group	PHA group	P
treatment
n	6	8
2 h	0.027±0.007	0.128±0.041	0.022
5 h	0.125±0.035	0.010±0.010	0.010
8 h	0.186±0.049	0.020±0.010	0.021
流产 Abortion	0.186±0.049	0.040±0.006	0.067

3      讨论 

       包括芸豆 PHA 在内的 PHA 对体外受精和胚胎发育的影响已进行了一些研究^[10,11], 本实验室以往的工作已证明^[8], 芸豆 PHA 可有效终止早中晚期的小鼠妊娠。研究显示^[19], PHA 受体对胚胎的着床具有重要作用。芸豆植物凝集素(Yunnan kidney bean lectin, YKBL; phtophytohemagglutinin, PHA)的特异性结合糖为b-半乳糖, a-甘露糖和a-乙酰葡萄糖胺。这些糖的结合特性赋予了芸豆 PHA 多方面的功能。新近的研究结果显示^[20], 半乳糖凝集素受体是一个决定着床成功与否的重要分子。妊娠发生时, 植入囊胚厚重的糖基化表面与母体子宫上皮的相互作用以特化方式高度控制的。Woidacki 等揭示了肥大细胞(mast cell)与妊娠的关系^[21], 表明肥大细胞通过分泌糖基结合蛋白半乳糖凝集素 -1 而对滋养层存活、胎盘形成和胎儿生长作出贡献。 

芸豆PHA和天花粉蛋白都是大分子物质, 两者在导致流产方面有一些相似之处。天花粉蛋白直接作用在胎盘的滋养层细胞, 它选择性地引起胎盘绒毛合体滋养层细胞的损害, 结果导致胎盘组织及胎儿的坏死而最终发展为流产^[17,18]。 

综合本实验及我们的相关实验结果, 我们认为芸豆PHA导致的流产过程与天花粉蛋白类似, 即芸豆 PHA 与胎盘滋养层细胞结合后, 通过损伤、凋亡和副凋亡途径诱导滋养层细胞的损坏。接触芸豆 PHA 的外层细胞浆脱落及细胞碎片充斥绒毛间隙,妨碍了血液流通, 使得蜕膜区螺旋动脉充血以至怒张。再进一步发展, 便造成绒毛间隙的血流停滞, 这样就很容易促成纤维蛋白的沉着而使血凝固。即造成在解剖时肉眼可见的胎盘淤血现象。由于血流堵塞与血液凝固, 形成营养代谢困难, 从而反过来加速了绒毛的坏死及胎盘丧失功能。这是造成流产的细胞及组织因素。胎儿的娩出很可能是在胎儿陷入危险时期出现应急反应而释放肾上腺皮质激素, 从而发动母体分娩机制的运行。如果胎盘绒毛未完全坏死尚保留部分功能, 或发动分娩早而进行迅速, 则可能娩出活婴^[24]。本实验的实际情况也是如此, 使用芸豆PHA时, 小鼠流产出的胎鼠大约60%在流出时是成活的^[8]。 

我们以往的实验结果表明^[25], 给予不同浓度的芸豆PHA处理细胞, 其结果不同, 2~5 mg/ml 的浓度可导致细胞在24 h内快速死亡, 表现为细胞膜直接损伤。而 1 mg/ml 的浓度则导致细胞的副凋亡, 表现为细胞膜完整, 而胞质出现空泡化现象。近年的研究还证明^[26], PHA可通过多条途径导致细胞的凋亡和自噬(autophagy)。另外, 作为大分子的PHA, 当其结合到细胞膜表面糖蛋白或多糖的甘露糖部分后,可以通过网格蛋白介导的胞吞作用内化进入细胞, 之后便优先积累在线粒体表面, 导致线粒体膜的通透性发生变化, 激活了自噬, 溶酶体降解, 并影响线粒体,导致细胞死亡^[27]。

胚胎在子宫内生长发育是一个多因素调节的过程, 母体血循环中的激素水平对妊娠的维持起着极为重要的作用, 激素水平的维持又受到神经调节与体液调节的影响。在妊娠期间, P 对抑制宫缩和维持蜕膜反应有重要作用, P 水平的改变会影响妊娠的维持。PRL 是卵巢内调控网络中的重要因子, 生理浓度的 PRL 可促进 P 的分泌。Negami 等和包洪初等研究表明^[28,29], 一定浓度的 PRL可促进子宫内膜细胞的生长和黏附。给予红芸豆 PHA 后, 孕鼠血清中的 E2、FSH、LH 和 T 与对照组相比较并没有发生明显变化, 但 P 和 PRL 发生了很大的变化。DNA 电泳及显微观察结果也表明^[30], 子宫注射芸豆PHA后,胎盘组织细胞水平上出现很多凋亡细胞, DNA 电泳的拖尾现象也佐证了胎盘坏死和凋亡的结果。

本研究在注射红芸豆 PHA 后 2 h 时孕鼠血清中的 P 水平明显高于 PBS 组, 这可能是 PHA 的注入引起流产前兆而激发胎盘分泌大量的 P 或使细胞合成的 P 释放所致。而注射红芸豆 PHA 后 5 h 时孕鼠血清中的 P 含量与 PBS 组无明显差异, 之后便明显低于 PBS 组。说明胎盘的 P 分泌功能已损伤或丧失。实验结果还显示, 在注射红芸豆PHA后2 h时, 孕鼠血清中 PRL 水平明显高于 PBS 组, 在注射红芸豆 PHA 后 8 h 及出现流产现象时, 孕鼠血清中 PRL 水平明显低于 PBS 组。我们的补充实验表明, 外源性注射 P 后再注射 PHA 能够推迟流产时间及降低流产率(未发表资料)。在人类, 胎盘产生的人类胎盘催乳素(human placenta lactogen, hPL)由胎盘合体滋养层细胞合成与分泌, 分泌后大部分进入绒毛间隙和胎盘血窦, 很少出现于胚胎体内。可能小鼠也是类似的情况, 由于注射红芸豆PHA初期引起合体滋养层细胞合成或坏死而出现 PRL 释放的高峰, 继而显著降低, 反映了合体滋养层细胞已受到破坏。我们还检测了胎盘内前列腺素的含量, 结果显示在注射红芸豆 PHA 后 P 浓度与前列腺素的比值发生变化, 注射红芸豆 PHA 后 5 h 时 P 浓度与前列腺素的比值明显低于 PBS 组。这与赵素娥等报道的加强前列腺素优势或减少P分泌, 打破前列腺素与P的平衡能导致流产的结果^[31]是一致的。李昆明等用大鼠建立的中药保胎模型也验证了流产者血清 PRL水平明显下降^[32],而保胎成功者 PRL 、P 水平明显升高。

综上所述, 本研究结果表明, P和PRL水平在红芸豆 PHA 终止小鼠中晚期妊娠中有明显变化, 而 E2 、T 、F S H 和 LH 水平无明显变化。说明红芸豆 PHA 作为一种大分子物质, 对神经内分泌中枢不会产生影响。 其对胎盘和母-胎界面的专一性结合作用是导致妊娠终止的原因。由于其毒副作用大大低于天花粉蛋白。并具有其他有益作用, 如提高免疫力和抗病毒作用。因此, 可利用这个性质开发非甾体、不影响中枢神经内分泌的安全避孕药和终止妊娠的药物。本研究在 PHA 作用机理的相关性激素水平获得了一些积极的结果, 首次明确了芸豆 PHA 导致妊娠终止的激素途径。为进一步深入研究红芸豆 PHA 终止妊娠的细胞和分子机理及相关产品开发提供了有用的资料。

参考文献:

[1]  孙册. 谈谈凝集素作用的基本原理和糖蛋白的寡糖结构.生命的化学, 1994, 14(2):36-7.

[2]  高燕会, 李润植, 毛雪, 等. 植物凝集素的防卫功能及其研究进展. 世界农业, 2000, 25(2):33-5.

[3]  王志斌, 李学勇, 郭三堆. 植物凝集素与抗虫基因工程. 生物技术通报, 1998, 14(2):5-10.

[4]  曾仲奎, 吴洽庆, 邓忠. 植物凝集素在植物体内的生理作用. 天然产物研究与开发, 1993, 5(3):69-76.

[5]  陈大元. 受精生物学. 北京: 科学出版社, 2000.

[6]  Okuda M, Sakaguchi K, Tomiyama S, et al. Use of phytohe-magglutinin in the treatment of maxillary cancer. Arch Otorhinolaryngol, 1980, 228(2):127-34.

[7]  黄圣凯, 张宗禹. 菜豆蛋白终止小鼠妊娠的药理研究. 江苏医药, 1980, 6(4):13-4.

[8]  张丽芬. 芸豆植物凝集素(PHA)对小鼠体外受精及胚胎发育的影响[硕士学位论文]. 昆明:云南师范大学, 2010.

[9]   Balzarini J, Van Laethem K, Hatse S, et al. Carbohydrate-binding agents cause deletions of highly conserved glycosylation sites in HIV GP120: a new therapeutic concept to hit the achilles heel of HIV. J Biol Chem, 2005, 280(49):41005-14.

[10] Oikawa T, Yanagimachi R, Nicolson GL. Wheat germ agglutinin blocks mammalian fertilization. Nature, 1973, 241 (5387):256-9.

[11]  Oikawa T, Nicolson GL, Yanagimachi R. Inhibition of hamster fertilization by phytoagglutinins. Exp Cell Res, 1974, 83(2): 239-46.

[12] 王昌梅, 张丽芬, 杨明洁, 等. 白芸豆植物凝集素对不同物种精子的凝集作用与抗孕效果研究. 中国计划生育学杂志, 2010, 18(5):272-6.

[13] 涂喜庆, 林婵珠, 叶美丽, 等. 房事后检测植物凝集素避孕酸粒对精子的作用. 广东医学, 1988, 4(21):38-9.

[14]  陈蕙玲, 周念辉, 孙册. ConA 的抗着床效应. 生理学报,1988, 40(2):202-7.

[15] Oppenheimer SB, Alvarez M, Nnoli J. Carbohydrate-based experimental therapeutics for cancer, HIV/AIDS and other diseases. Acta Histochem, 2008, 110(1):6-13.

[16] Sindhura BR, Vishwanath Reddy H, Inamdar SR, et al. Lectins: Magic Bullet towards HIV Gp120. Antivir Antiretrovir, 2012, 4(4):101-2.

[17]Balzarini J, Van Damme L. Intravaginal and intrarectal microbicides to prevent HIV infection. CMAJ, 2005, 172(4):461-4.

[18] 王敏康, 王昌梅, 张丽芬. 植物凝集素在避孕与预防性传播疾病中的应用前景. 生殖与避孕, 2009, 29(10):670-5.

[19] Stewart J, Bebington CR, Mukhtar DD. Lectin binding char-acteristics of mouse placental cells. Anat, 2000, 196(Pt 3): 371-8.

[20] Jones CJ, Aplin JD. Glycosylation at the fetomaternal interface: does the glycocode play a critical role in implantation? Glycoconj J, 2009, 26(3):359-66.

[21] Woidacki K, Popovic M, Metz M, et al. Mast cells rescue implantation defects caused by c-kit deficiency. Death Dis, 2013, 4:e462.

[22] 仇伟欣. 天花粉药理学研究进展. 中国中医药信息杂志, 1996, 3(6):11-3.

[23] 张茹, 黄利鸣, 岑畅飞. 天花粉蛋白作用机制研究进展. 时珍国医国药, 2009, 20(12):3116-7.

[24] 王应天, 朱瑞明, 黄家洪, 等. 天花粉蛋白引起称猴胎盘绒毛损伤的研究. 动物学报, 1976, 22(2):156-65.

[25] 张丽芬, 王昌梅, 杨明洁, 等. 白芸豆植物凝集素对小鼠胚胎发育的影响. 中国中药杂志, 2011, 36(12):1665-9.

[26] 刘东亮, 吕慧, 李婷婷, 等. 植物凝集素诱导肿瘤细胞凋亡和自噬的研究进展. 细胞与分子免疫学杂志, 2012, 28(6): 669-71.

[27]Lei HY, Chang CP．Induction of autophagy by concanavalin A and its application in anti-tumor therapy. Autophagy, 2007, 3(4):402-4．

[28] Negami Al, Tominaga T. Effects of prolaetinon cultured human dometrial cells. Horm Res, 1991, 35:50.

[29] 包洪初. 细胞因子的改变与自然流产的相关性研究进展,国外医学妇产科学分册, 2003, 30(6):362-5.

[30] 杨成焕, 叶媛, 杨姚, 等. 芸豆凝集素(PHA)终止小鼠妊娠部分机理研究. 苏州:中国动物学会细胞与分子显微技术分会第十七次学术研讨会论文摘要集, 2014:42.

[31] 赵素娥, 王娜. 米非司酮对中期妊娠胎盘内分泌功能的影响. 河北医学, 2011, 17(9):1218-9.

[32] 李昆明, 归绥琪, 蒋立辉, 等. 正常早孕与流产患者蜕膜局部 P R L 、P 、E 2 水平及其受体 m R N A 表达水平的比较.生殖与避孕, 2002, 22(6):351-4.

Changes of sexual hormones in mid-late pregnant mice after

administration of red kidney beans lectin

Cheng-huan YANG, Yuan YE, Yao YANG, Kuo LI, Ya-ting YAO,Jing-jing WANG, Tian ZHANG, Min-kang WANG

( Engineering Research Center of Sustainable Development and Utilization of Biomass Energy, Ministry of Education; School of Life Sciences, Yunnan Normal University, Kunming, 650500)

【 ABSTRACT】Objective: To explore the changes of serum sexual hormones from pregnant mice with temination of middle and late pregnancyby administering red kidney bean phytohemagglutinin or lectin(PHA or RKBL). Methods: Fourteen-day pregnant (mid-late period in pregnancy) mice were injected5mg PHA to one side of uterine by nonsurgical method trough vaginal. PBSas usedw in control group. Blood sample, uterine and placnta were collected from ten miceat each time of2 h, 5 h, 8 h after PHA or PBSadministration per groupand sexual hormones above-mentioned were tested by electrochemical luminescence. Sexual hormones and pregnancy outcome between the two groups were compared. Paraffin section of uterine and placenta dyed by Pyronine-methyl green was observed.Results: There were no difference for luteinizing hormone (LH), follicle-stimulating hormone (FSH), estradiol (E2) and testosterone (T) between PHAgroup and PBSgroup. However, there were significantly differences on progesterone (P) and prolactin (PRL) between PHAgroup and PBS group. It showed that the P and PRL levels significantly increasedcompared with control group at 2 h and deceased significantly at abortion timecompared with control group.An obvious apoptosis in placenta appeared in PHA groupConclusion.: Termination of mid-late pregnancy in mice by red kidney beans PHA did not change 2the,FSH,E LH and T levelsBut. it changes the P and PRL levels in process of termination pregnancyRed. kidney beans PHA played the role incallo uterine area and had no influences on hypothalamus-pituitary neuro-endocrine system.

Key words: red kidney beans;phytohemagglutinin (PHA); mouse; mid-late pregnancy; sexual hormones; prolactin (PRL); progesterone (P)